Metoda bacteriologică de cercetare: etape, scopuri, caracteristici

Studiul bacteriilor are o mare importanță practică pentru om. Până în prezent, au fost descoperite un număr mare de procariote, care diferă între ele în ceea ce privește patogenitatea, distribuția, forma, mărimea, numărul de flagel și alți parametri. Pentru a studia această tulpină în detaliu, se folosește o metodă bacteriologică.

Care sunt metodele de analiză a celulelor bacteriene?

Pentru a determina dacă bacteriile sunt patogene, cultura este testată în diferite moduri. Printre acestea:

1. Metoda bacteriostopică.

2. Metoda bacteriologică.

3. Metoda biologică.

Bacterioscopic și bacteriologic metode de cercetare în funcție de locul de muncă de celule procariote ca analiza biologică este necesară pentru a examina impactul unor astfel de celule în organismul viu al animalelor experimentale. După gradul de manifestare a acestora sau alte semne de boală cercetător poate deduce prezența sau absența bacteriilor patogene în eșantion, precum și propaga lor natural în corpul animalului pentru cultura și utilizarea lor în alte părți.

Metoda bacteriologică de cercetare diferă de metoda bacterioscopică. În prima, o cultură special pregătită de procariote vii este folosită pentru analiză, atunci când cea de-a doua lucrează cu celule moarte sau vii pe un diapozitiv.

Etapele metodei bacteriologice de investigare. microbiologie

Principiul studierii proprietăților culturii bacteriene pot fi utile pentru microbiologi, oameni de știință care au stabilit pentru a explora celulele procariote, precum și pentru laborator, a cărui sarcină este de a stabili bacteriile patogene sau nepatogene, iar apoi diagnosticul pacientului.

Metoda de studiere a bacteriilor este împărțită în trei etape:

1. Izolarea bacteriilor din proba inițială.

2. Semănarea bacteriilor și cultivarea culturii pure, studierea proprietăților sale.

3. Studiu detaliat al celulelor bacteriene.

Prima etapă

Eșantionul sau frotiu este luat de pe suprafața liberă a mediului sau de pacient. Astfel, primim un "cocktail" dintr-o varietate de specii de bacterii care trebuie să fie însămânțate într-un mediu nutritiv. Uneori devine posibilă identificarea imediat a bacteriilor necesare, cunoscând focarele lor de distribuție în organism.

După două sau trei zile, coloniile necesare sunt selectate și placate pe suportul solid al vaselor Petri cu ajutorul unei bucăți sterile. Multe laboratoare lucrează cu tuburi de testare, unde poate fi prezent un mediu nutritiv solid sau lichid. De asemenea, este metoda bacteriologică de cercetare în domeniul microbiologiei.

A doua etapă

După obținerea coloniilor individuale de bacterii, se efectuează o macro și microanaliză directă. Se măsoară toți parametrii coloniilor, se determină culoarea și forma fiecăruia dintre ele. Se face deseori prin numărarea de colonii pe un vas Petri și apoi în materialul de pornire. Acest lucru este important în analiza bacteriilor patogene, pe numărul cărora depinde gradul bolii.

Metoda bacteriologică de investigare, a doua etapă a căreia este studierea coloniilor individuale de microorganisme, poate fi asociată cu o metodă biologică de analiză bacteriană. Un alt obiectiv al lucrării în această etapă este creșterea cantității de material sursă. Se poate face pe un mediu nutritiv și este posibil să se efectueze un experiment in vivo în organismele experimentale vii. Bacteriile patogene se vor multiplica și, ca rezultat, sângele va conține milioane de celule procariote. Din sângele luat, este ușor să se pregătească materialul de lucru necesar pentru bacterii.

A treia etapă

Cea mai importantă parte a studiului este determinarea proprietăților morfologice, biochimice, toxigenice și antigenice ale culturii bacteriene. Se lucrează cu culturi anterior "purificate" pe un mediu nutritiv, precum și cu preparate (adesea colorate) sub microscop.

Set de membru al bacteriilor patogene sau oportuniste la un anumit grup taxonomic, precum și pentru a determina rezistența lor de droguri permite metoda de cercetare bacteriologică. Etapa 3 - antibiotice, adică analiza comportamentului celulelor bacteriene în condițiile medicamentelor în mediul înconjurător.

Studiul rezistenței culturii la un antibiotic are o mare importanță practică atunci când este necesar să se prescrie pentru un anumit pacient medicamentele necesare și, cel mai important, eficiente. Aici și metoda bacteriologică de cercetare poate ajuta.

Ce este un mediu nutritiv?

Pentru dezvoltarea și reproducerea bacteriilor ar trebui să fie pre-pregătite medii nutritive. Prin consistență, ele pot fi lichide sau solide, și de origine - legume sau animale.

Cerințe de bază pentru mediile nutritive:

1. Sterilitatea.

2. Transparența maximă.

3. Aciditatea optimă, presiunea osmotică, activitatea apei și a altor cantități biologice.

Prepararea coloniilor izolate

1. Metoda lui Drigalsky. Se compune prin faptul că se aplică o bucle bacteriene cu un frotiu cu diverse specii de microorganisme. Această buclă se efectuează pe primul vas Petri cu mediu nutritiv. Mai mult, fără a schimba buclele, metoda materialului rezidual se efectuează pe plăcile a doua și a treia a lui Petri. Deci, pe ultimele mostre din colonie, bacteriile nu vor fi însămânțate prea strâns, simplificând astfel posibilitatea de a găsi bacteriile necesare muncii.

2. Metoda Koch. Utilizează tuburi cu mediu nutritiv topit. Se introduce o buclă sau o pipetă cu un germen de bacterii, după care conținutul tubului se toarnă pe o placă specială. Agarul (sau gelatina) îngheață după un timp, iar în grosimea sa este ușor să găsiți coloniile necesare celulelor. Este important să începeți diluarea amestecului de bacterii în tuburile de testare, astfel încât concentrația de microorganisme să nu fie foarte mare.

Metoda bacteriologică de investigare, etapele căreia se bazează pe izolarea culturii bacteriene dorite, nu se face fără aceste două metode de a găsi colonii izolate.

antibiotikogrammy

Din punct de vedere vizual, reacția bacteriilor la medicamente poate fi văzută în două moduri practice:

1. Metoda discurilor de hârtie.

2. Diluarea bacteriilor și a antibioticelor într-un mediu lichid.

Metoda discului de hârtie necesită o cultură a microorganismelor care au fost cultivate pe un mediu nutritiv solid. Pe acest mediu, sunt plasate mai multe hârtii în formă rotundă, impregnate cu antibiotice. Dacă medicamentul reușește să facă față cu succes neutralizării celulele bacteriene, După acest tratament, va exista un sit lipsit de colonii. Dacă reacția la antibiotic este negativă, bacteriile vor supraviețui.

În cazul utilizării unui mediu nutritiv lichid, mai întâi se prepară mai multe tuburi cu o cultură de bacterii cu diferite grade de diluție. Antibioticele sunt adăugate la aceste tuburi și pe parcursul zilei observă procesul de interacțiune al substanței și al microorganismelor. În cele din urmă, se obține o antibioticogramă calitativă, din care se poate evalua eficacitatea medicamentului pentru o anumită cultură.

Principalele sarcini ale analizei

Sunt enumerate obiectivele și etapele metodei bacteriologice de investigare.

1. Obțineți materialul sursă care va fi utilizat pentru izolarea coloniilor bacteriene. Poate fi o frotiu de pe suprafața oricărui obiect, membrană mucoasă sau cavitate a corpului uman, un test de sânge.

2. Cultivarea culturii pe un mediu nutritiv solid. După 24-48 de ore pe un vas Petri găsiți colonii de bacterii de diferite specii. Alegem criteriile morfologice și / sau biochimice necesare și continuăm să lucrăm cu el.

3. Reproducerea culturii obținute. Metoda bacteriologică de cercetare poate fi bazată pe o metodă mecanică sau biologică de creștere a numărului de culturi bacteriene. În primul caz, se lucrează cu medii nutritive solide sau lichide pe care bacteriile se înmulțesc într-un termostat și formează noi colonii. Metoda biologică necesită condiții naturale pentru creșterea numărului de bacterii, astfel încât un animal testat este infectat cu microorganisme aici. Câteva zile mai târziu, multe procariote pot fi găsite într-o probă de sânge sau în frotiu.

4. Lucrați cu o cultură purificată. Pentru a determina poziția taxonomică a bacteriilor, precum și afilierea lor la patogeni, este necesar să se realizeze o analiză detaliată a celulelor pe baza caracteristicilor morfologice și biochimice. Atunci când se investighează grupuri patogene de microorganisme, este important să se știe cât de eficient este acțiunea antibioticelor.

Aceasta a fost o caracteristică generală a metodei bacteriologice de investigare.

Caracteristicile analizei

Principala regulă de efectuare a cercetărilor bacteriologice este sterilitatea maximă. Dacă se lucrează cu tuburi de test, culturile și transplanturile de bacterii ar trebui să se efectueze numai cu ajutorul unui spirit încălzit.

Toate etapele metodei bacteriologice de investigație necesită utilizarea unei bucla speciale sau a unei pipete Pasteur. Ambele instrumente trebuie să fie pre-tratate în flacăra lămpii spirtoase. În ceea ce privește pipeta Pasteur, înainte de sterilizarea termică este necesară ruperea vârfului pipetei cu pensete.

Tehnica de însămânțare a bacteriilor are și propriile caracteristici. În primul rând, atunci când semănuiți pe suporturi solide, efectuați o bucla bacteriană pe suprafața agarului. Bucla, desigur, ar trebui să aibă deja o probă de microorganisme pe suprafață. De asemenea, se practică să se semene în interiorul mediului de cultură, caz în care bucla sau pipeta trebuie să ajungă la fundul vasului Petri.

Atunci când se lucrează cu medii lichide, se utilizează tuburi. Este important să se asigure că lichidul nu atinge marginile sticlărie de laborator sau de plută și instrumente utilizate (picurator, balamale), nu atingeți obiecte străine și suprafețe.

Importanța metodei biologice de cercetare

Analiza unui eșantion de bacterii are aplicația sa practică. În primul rând, metoda bacteriologică de cercetare poate fi utilizată în medicină. De exemplu, este necesar să se studieze microflora pacientului pentru a stabili diagnosticul corect și, de asemenea, pentru a se stabili cursul corect al tratamentului. Aici ajută antibioticograma, care va arăta activitatea medicamentelor împotriva agentului cauzal al bolilor.

Analiza bacteriilor este folosită în laborator pentru a determina astfel de boli periculoase cum ar fi tuberculoza, tifoidul recurent sau gonoreea. Este, de asemenea, folosit pentru a studia compoziția bacteriană a amigdalelor, a cavităților organelor.

Metoda bacteriologică de cercetare poate fi utilizată pentru a determina contaminarea mediului. Conform compoziției cantitative și calitative a frotiului de pe suprafața unui obiect, gradul de populație al acestui mediu este determinat de microorganisme.