Metode microbiologice pentru studiul apei, solului, aerului

Microorganismele sunt cele mai mici, majoritatea creaturi cu o singură celulă, larg răspândite în natură. Acestea se găsesc în toate mediile (aer, sol, apă), la oameni și la animale, în plante.

Diversitatea calității și numărul de microorganisme depind în principal de compuși nutriționali. Cu toate acestea, sunt importante și umiditatea, regimul de temperatură, aerarea, acțiunea razelor solare și alți factori.

Metode de cercetare sanitaro-microbiologică mediile naturale pot detecta prezența microorganismelor patogene, determină numărul acestora și, în concordanță cu rezultatele obținute, pot dezvolta măsuri de eliminare sau prevenire a bolilor infecțioase. În plus, contabilitatea cantitativă este necesară pentru modelarea ecosistemelor și dezvoltarea principiilor pentru gestionarea proceselor naturale. Să analizăm în continuare, ce se întâmplă metodele de cercetare microbiologică.

sol

Este considerat de către oamenii de știință ca fiind una dintre căile posibile de transmitere a patologiilor infecțioase. Odată cu izolarea bolnavilor sau animalelor, microorganismele patogene penetrează solul. Unele dintre ele, în special sporul, pot rămâne în pământ o perioadă lungă de timp (uneori câteva zeci de ani). În sol intrați în agenții patogeni ai unor astfel de infecții periculoase precum tetanosul, antraxul, botulismul etc. Metode de studiu sanitar-microbiologic al solului permite să se determine "numărul microbian" (numărul de microorganisme într-un gram de sol), precum și indicele coli (numărul de E. coli).

Analiza solului: informații generale

K metodele de studiu microbiologic al solului Mai întâi de toate, microscopia directă și însămânțarea pe dens un mediu nutritiv. Populațiile microorganismelor și grupurile lor care locuiesc în sol diferă în funcție de poziția lor taxonomică și de funcțiile ecologice. În știință, ele sunt unite sub termenul general "biota solului". Grunt este habitatul unui număr mare de microorganisme. Un gram de sol conține între 1 și 10 miliarde de celule. În acest mediu, se descompune substanțele organice cu participarea diverselor microorganisme saprofite.

Metoda microscopică de cercetare microbiologică: etape

Analiza mediului începe cu eșantionarea. Pentru a face acest lucru, utilizați un cuțit de alcool curățat anterior și frecat (puteți folosi o lopată). După aceasta, proba este pregătită. Următorul pas este numărarea celulelor pe frotiuri colorate. Să considerăm fiecare etapă separat.

Prelevarea de probe

Atunci când se analizează solul arabil, de regulă se prelevează probe din adâncimea întregului strat. Mai întâi, îndepărtați 2-3 cm de partea superioară a solului, deoarece poate conține microfloră străină. După aceea, monoliturile sunt luate din situl studiat al solului. Lungimea fiecăruia dintre ele trebuie să corespundă grosimii stratului din care trebuie să luați o probă.

Pe site-ul de 100-200 de metri pătrați. m, sunt luate 7-10 eșantioane. Greutatea fiecăruia este de aproximativ 0,5 kg. Probele trebuie amestecate bine într-o pungă. După aceasta, luați o probă medie cântărind aproximativ 1 kg. Ar trebui să fie plasat într-o pungă de pergament (sterilă), încorporată într-o pungă de țesut. Înainte de analiza directă, proba este stocată în frigider.

Pregătirea pentru cercetare

Pământul amestecat este turnat pe geamul uscat. În prealabil trebuie să fie frecat cu alcool și ars peste arzător. Folosind o spatulă, solul este bine amestecat și așezat uniform. Fără eșec, este necesară eliminarea rădăcinilor, a altor elemente străine. Pentru aceasta, sunt folosite pensete. Înainte de lucru, pensetele și spatulul sunt calcinate peste arzător și răcite.

Din părțile mici ale solului distribuite peste sticlă se iau porțiuni mici. Acestea sunt cântărite într-o ceașcă de porțelan la scară tehnică. Etapa obligatorie de microscopie metoda de cercetare microbiologică este o procesare specială a probelor. Este necesar să se pregătească în prealabil 2 baloane sterile. Capacitatea lor nu trebuie să depășească 250 ml. Se toarnă 100 ml de apă de la robinet într-unul dintre baloane. Din acesta se iau 0,4-0,8 ml de lichid și se înmoaie eșantionul de sol în stare păstoasă. Amestecul trebuie frecat cu un deget sau cu un pistil de cauciuc timp de 5 minute.

Cu apă din primul balon, masa solului este transferată într-un balon gol. Apoi este frecat din nou. După aceasta, masa este transferată în balon lângă flacăra arzătorului. Containerul cu suspensie de sol este agitat pe balansoar timp de 5 minute. După aceea, este lăsat să se stabilească pentru aproximativ 30 de secunde. Acest lucru este necesar pentru ca particulele mari să se situeze. După o jumătate de minut, masa este utilizată pentru pregătirea preparatului.

Numărătoarea celulelor pe frotiuri fixe

Studiul microscopic direct al solului se realizează de către metoda de cercetare microbiologică, dezvoltat de Vinogradsky. Într-un anumit volum din suspensia preparată, se măsoară numărul de celule de microorganisme. Studiul frotiurilor fixe vă permite să economisiți medicamente pe o perioadă lungă de timp și să efectuați calcule la orice oră convenabilă.

Prepararea medicamentului este după cum urmează. Un anumit volum al suspensiei (de obicei 0,02-0,05 ml) se aplică cu o microcipetă pe diapozitiv. La această soluție s-a adăugat o picătură de agar-agar (polizaharid agaropectin amestec și se extrage de agaroză din alge brune și roșii la Marea Neagră), agitat rapid si se intinde pe o suprafata de 4-6 mp. vezi Frotiul se usucă în aer și se fixează timp de 20-30 minute. alcool (96%). Apoi, preparatul este umezit cu apă distilată, introdus în soluția de erozină carbolică timp de 20-30 minute.

Dupa colorare, se spala si se usuca in aer. Celulele sunt numărate cu un obiectiv de imersiune.

Semănarea pe suporturi dense

microscopic metodele de cercetare microbiologică poate detecta un număr mare de microorganisme. Dar, în ciuda aceasta, metoda însămânțarea este considerată cea mai obișnuită practică. Esența sa constă în semănarea volumului preparatului (suspensie de sol) într-un vas Petri pe un mediu dens.

acest metoda de cercetare microbiologică ne permite să luăm în considerare nu numai cantitatea, ci și compoziția grupului și, în unele cazuri, compoziția speciilor din flora microscopică. Numărătoarea numărului de colonii se face, de regulă, din fundul vasului Petri în lumină transmisă. În secțiunea numită, punctul este plasat cu un marcator sau cu cerneală.

Analiza apei

Microflora unui corp de apă, de regulă, reflectă compoziția microbiană a solului din jurul acestuia. În această privință, metodele de studiu sanitar și microbiologic al apei și solului au o valoare practică deosebită în studierea stării unui anumit ecosistem. Bazinele proaspete conțin, de regulă, cocci, bacterii în formă de tijă.

Anaerobii din apă se găsesc în cantități mici. De regulă, se reproduc la fundul rezervoarelor, în silozuri, luând parte la procesele de purificare. Microflora oceanelor și a mărilor este reprezentată în principal de bacterii (halofile) care iubesc sarea.

Practic nu există puțuri arteziene de microorganisme în apă. Acest lucru se datorează capacității de filtrare a stratului de sol.

general acceptate metodele de cercetare microbiologică a apei se ia în considerare determinarea unui număr microbian și a unei colite sau a unui indice coli. Primul indicator indică numărul de bacterii în 1 ml de lichid. Indexul reprezintă numărul Coli de coliformi prezente într-un litru de apă, iar în cazul în titru - numărul minim sau maxim de lichid de diluție în care acestea pot fi detectate.

Determinarea numărului microbian

Această metodă de cercetare sanitară microbiologică a apei este după cum urmează. În 1 ml de apă se determină numărul de anaerobi mezofile și facultativi (intermediar) aerobi capabile de pe carne peptonă agar (mediu primar), la 37 ° C. în timpul zilei pentru a forma colonii, vizibile cu o creștere de 2-5 r. sau cu ochiul liber.

Etapa cheie a metoda de cercetare a apei microbiologice seamănă. Din fiecare probă sunt însămânțate cel puțin 2 volume diferite. La analizarea apei de la robinet, la fiecare cană se adaugă 1-0,1 ml lichid pur și 0,01-0,001 ml lichid contaminat. Pentru însămânțarea de 0,1 ml sau mai puțin, lichidul este diluat cu apă distilată (sterilă). Se prepară în mod consecvent diluții de zece ori. 1 ml din fiecare dintre acestea se adaugă la două feluri de mâncare Petri.

Diluțiile sunt umplute cu agar nutritiv. Trebuie să fie pre-topit și răcit la 45 de grade. După amestecarea activă, mediul este lăsat pe o suprafață orizontală pentru a se solidifica. La 37 de grade. culturile sunt cultivate pe parcursul zilei. în curs de revizuire metoda de cercetare a apei microbiologice permite luarea în considerare a rezultatelor acelor cupă în care numărul de colonii se situează între 30 și 300.

aer

Este considerat un mediu de tranzit pentru microorganisme. Principalul metodele de cercetare aeriană microbiologică sedimentare (sedimentare) și aspirație.

Microflora mediului aerian este împărțită condiționat într-o variabilă și o constantă. Printre acestea se numără drojdie, cocci care formează pigmenți, bacili sportivi, tije și alte microorganisme, rezistente la uscare, expunere la lumină. Reprezentanții microflorei variabile, care pătrund în aer din habitatul obișnuit pentru ei, nu își mai duc viabilitatea mult timp.

În aerul megacitelor mari, microorganismele sunt mult mai mult decât în ​​mediul aerian al zonelor rurale. Deasupra mărilor, pădurile de bacterii sunt foarte puține. Ștergerea aerului este facilitată de precipitații: zăpadă și ploaie. În spațiile închise ale microbilor mult mai mult decât în ​​spații deschise. Suma lor crește în perioada de iarnă, în absența unei emisiuni regulate.

sedimentare

acest metodă de cercetare microbiologică în microbiologie este considerat cel mai simplu. Se bazează pe așezarea picăturilor și a particulelor pe suprafața agarului într-un vas deschis Petri sub acțiunea gravitației. Metoda de sedimentare nu determină cu exactitate numărul de bacterii din aer. Faptul este că pe o ceașcă deschisă pentru a prinde mici fracțiuni de particule de praf și picături bacteriene este destul de dificilă. Pe suprafață, sunt reținute în principal particulele mari.

Această metodă nu este utilizată în analiza aerului atmosferic. Acest mediu este caracterizat de fluctuații mari în viteza fluxului de aer. Sedimentarea, cu toate acestea, poate fi folosită în absența unor instrumente mai sofisticate sau o sursă de energie electrică.

Determinarea numărului microbian se efectuează conform metodei lui Omelyansky. În conformitate cu aceasta, timp de 5 minute pe suprafața de agar, cu o suprafață de 100 de metri pătrați. cm elimină numărul de bacterii prezente în 10 litri de aer.

Ordinul 535 "Cu privire la unificarea metodelor microbiologice de cercetare"

Analiza bacteriologică ocupă un loc important într-un complex de activități clinice și de laborator destinate diagnosticării, prevenirii și tratamentului unei varietăți de boli infecțioase. Cu toate acestea, ele nu se limitează la cercetarea în domeniul mediului.

De o importanță deosebită este analiza bacteriologică a materialului biologic în instituțiile medicale. La cercetările petrecute în instituțiile medicale, se fac cerințe ridicate. Scopul Ordinului "Cu privire la unificarea metodelor microbiologice de cercetare" este îmbunătățirea analizei bacteriologice, îmbunătățirea calității și eficienței diagnosticului microbiologic.

Examen microscopic frotiuri pentru femei

Este o metodă cheie de analiză în diagnosticul infecțiilor cu transmitere sexuală și a bolilor oportuniste (cauzate de bacterii oportuniste).

Analiza microscopică vă permite să evaluați compoziția calitativă și cantitativă a microflorei, verificați corectitudinea eșantionării. De exemplu, prezența epiteliului vaginal într-un frotiu luat din canalul cervical indică o încălcare a regulilor de selecție test biologic.

Merită să spunem că examinarea microbiologică în acest caz este, în general, însoțită de anumite probleme. Acestea sunt legate de faptul că în părțile inferioare ale tractului genital există în mod normal o microfloră diversă, care variază în diferite perioade de vârstă. Pentru a îmbunătăți eficacitatea studiului, au fost elaborate norme unificate.

Diagnosticul infecțiilor virale

Se efectuează prin metode de detectare a agenților patogeni de ARN și ADN. Ele se bazează în principal pe determinarea secvențelor de nucleotide din materialul patologic. Pentru aceasta, sunt utilizate sonde moleculare. Acestea sunt acizi nucleici produși artificial, complementați acizilor virali etichetați cu o etichetă radioactivă sau biotină.

O caracteristică specială a metodei este copierea multiplă a unui fragment ADN specific, care include câteva sute (sau zeci de) perechi de nucleotide. Mecanismul de replicare (copiere) este că finalizarea poate începe numai în anumite blocuri. Pentru a le crea, se folosesc grunduri (grunduri). Sunt oligonucleotide sintetizate.

Diagnosticarea PCR (reacția în lanț a polimerazei) este ușor de realizat. Această metodă vă permite să obțineți rapid un rezultat utilizând o cantitate mică de material patologic. Cu ajutorul diagnosticării PCR, sunt detectate infecții acute, cronice și latente (ascunse).

Cu sensibilitate, această metodă este considerată preferabilă. Cu toate acestea, în prezent sistemele de testare nu sunt suficient de fiabile, astfel încât diagnosticarea PCR nu poate înlocui complet metodele tradiționale.