Metode de stabilire a reacției de precipitare

Acest articol va fi dedicat fenomenului de reacție de precipitare. Aici luăm în considerare caracteristicile afirmației acestui fenomen, fenomenul de difuzie, o caracteristică generală, un rol în viața umană și multe altele.

Cunoașterea fenomenului

Precipitarea - serotipul acestui fenomen care are loc în timpul interacțiunii dintre antigene solubile cu anticorpi și precipitare observate prin aceasta - precipita.
Caracterizarea generală a reacției de precipitare este forma unui efect consistent al antigenului și anticorpului. Astfel de tipuri de interacțiuni permit determinarea prezenței antigenilor necunoscuți în substanța de testat prin adăugarea de anticorpi și antigeni cunoscuți. Procesul de precipitare fără prezența sărurilor va fi mai rău, iar cel mai bun optim se află în intervalul de 7,0-7,4 pH.

Elemente compuse ale reacției

Printre componentele reacției de precipitare se disting trei elemente principale:

1. Un antigen care are o natură moleculară. Este într-o stare de tip fin dispersat, cu alte cuvinte, este solubilă. Și, de asemenea, numit pretsipitogenom un astfel de antigen, care este un lizat de țesut sau de extract, și altele. Pretsipitogen are o diferență caracteristică de aglutinogen care constă în mărimea particulelor care constă. Aglutinogenul are o dimensiune inerentă a celulei, iar precipitarea este proporțională cu mărimea moleculei. Soluția antigenică este caracterizată prin transparență.
2. Un anticorp localizat în serul sângelui uman, precum și în serul imun diagnostic, care conține anticorpii studiați.
3. Electroliții sunt o soluție de clorură de sodiu, izotonică.

Prepararea unui precipitat

Formularea reacției de precipitare este imposibilă fără o precipitogenă, care este obținută prin măcinarea materialelor și extragerea antigenilor de natură proteică din acestea. Extracția are loc prin fierbere sau prin alte mijloace.
Un prim exemplu sunt lizatele pretsipitogenov și extractele de țesuturi și organe, ser, diverse tipuri de filtratelor bazate pe culturi în bulion de microbi, precum si extract de ser fiziologic microorganisme și substanțe autolizatnye.

Stabilirea precipitațiilor

Acum, să luăm în considerare metoda de stabilire a reacției de precipitare.
Se efectuează o reacție de precipitare inelară, care are loc în eprubete de testare special pregătite. În cavitatea vaselor, adăugați ser, turnându-l prin perete cu un vârf de pipetă. Apoi, de deasupra, se produce o stratificare a unei cantități corespunzătoare de precipitogen, iar apoi tubul este adus într-o poziție verticală față de orizontală. Formularea și înregistrarea reacției de precipitare sunt operații foarte scrupuloase. Rezultatul este înregistrat după apariția unui inel alb la limita dintre antigen și anticorp. Dacă elementele de reacție ale reacției corespund una cu alta, ele sunt legate, dar acest lucru devine vizibil după o lungă perioadă de interacțiune.
Reacția de precipitare se realizează într-un vas Petri sau pe o lamă, care transporta gel de agar, prin aplicarea unui strat subțire de ea. După ce se solidifică, un mic număr de godeuri sunt tăiate în gel, în care vor fi plasate antigene și anticorpi. Există două modalități de a face acest lucru: metoda imunodifuziei radiale și imunodifuzia dublă.

Informații generale

Mecanica muncii de precipitare este similară dispozitivului de aglutinare. Sub influența serului imun, un antigen care a intrat deja într-o reacție reduce gradul de dispersie. O condiție importantă este transparența serului și a antigenului.
Îmbunătățirea înregistrării reacției poate fi dacă întărirea antigenelor pe anticorpi. Ca o consecință, se poate observa apariția precipitaților sub forma unui inel. Acest fenomen se numește precipitare inelară și se realizează în tuburi de testare speciale având un diametru de 2,5 până la 3,5 mm. Unul dintre exemplele cele mai răspândite ale reacției de precipitare este diagnosticul de antrax.
Precipitarea face posibilă determinarea nivelului de toxicogenitate al culturii difterice în agar.
În cursul reacției luate în considerare, apare precipitarea complexelor antigenice și a anticorpilor. Precipitarea este un fenomen imunologic care permite determinarea cantității de conținut de anticorpi în serul unui pacient sau al unei persoane și animale vaccinate.

Efectul titrării

Este important să se știe că datele obținute prin titrarea metodei de mai sus nu au o expresie cantitativă. Pentru a crea și a analiza evaluarea cantitativă a numărului limitat de anticorpi, M. Heidelberger și E. Kabat au elaborat o tehnică specială de reacție bazată pe căutarea și identificarea unei zone de echivalență. Amestecarea numărului de antigeni în funcție de vârstă cu o cantitate constantă de antiser conduce la o creștere a precipitatului inițial și apoi scade din nou datorită creșterii capacității de dizolvare a complecșilor de antigen. După determinarea cantității de anticorpi din supernatant conținute în fiecare tub, se poate constata că într-un anumit număr de antene cu anticorpi, lichidul va fi absent. Aici va fi format cel mai mare precipitat, comparativ cu alte eprubete. Datorită acestei scăderi a precipitatului proteic antigenic din valorile totale ale proteinei, este posibil să se obțină valoarea exactă a anticorpilor conținute în volumul unui ser specific studiat. Mai mult, cantitatea de molecule de proteine ​​din precipitat este determinată de cantitatea de azot sau de metodele colorimetrice.

Evaluarea valorilor

Evaluarea valorilor precipitațiilor în metodologia de diagnostic trebuie să ia în considerare probabilitatea prezenței anticorpului ser imun care nu posedă proprietatea de precipitare, ceea ce înseamnă că el nu se poate forma un precipitat după răspunsul la antigeni. Lista acestor molecule includ anticorpi incomplet și unele tipuri de grupa A gamma-globulinelor.

Reacția de precipitare în condiții de laborator își găsește aplicarea într-o varietate de modificări. De exemplu, reacția de termoprecipitare este utilizată pentru a detecta antigeni botulinici bacterieni, antrax, etc., care nu suferă denaturare termică. Spre deosebire de precipitațiile inelului, un tip similar de reacție folosește filtraturile materialului considerat în stare fiartă.
Analiza reacției de precipitare într-un amestec complex nu face posibilă caracterizarea proprietăților elementelor individuale ale amestecului. În astfel de cazuri, persoana recurge la metoda de precipitare în agar și, de asemenea, utilizează imunoelectroforeza.

Precipitarea naturii difuze

În acest domeniu de cercetare există conceptul de reacție a precipitațiilor difuze (RAP). Se bazează pe capacitatea de a difuza anticorpii gel și antigeni solubili. Difuzia este capacitatea unei molecule a unei anumite substanțe de a pătrunde în moleculele alteia, care este cauzată de mișcarea termică.
Gelul este un sistem de dispersie, în care faza lichidă este distribuită uniform în faza solidă. Cel mai adesea pentru această reacție se utilizează gelul de agar.
După ce au dat parametrii, în situația în care moleculele pot difuza unul față de celălalt, întâlnirea lor va fi însoțită de formarea unui complex de anticorpi + anticorpi. Un astfel de neoplasm poate difuza, fiind în gel propriu-zis, și va precipita, având forma unei benzi care poate fi detectată de ochii neautorizați. În cazul omologiei antigenului și a anticorpului, banda nu se va forma.
Crearea condițiilor care vor fi difuzia, iar în stratul de agar, oferă o componente de umplere, dar numărul total de găuri și poziția lor relativă este determinată de tipul de problemă care trebuie rezolvată. RAP permite unei persoane să detecteze și să identifice virusurile izolate necunoscute utilizând un studiu care utilizează serul cunoscut din anticorpi.

cerere

Precipitarea se utilizează pe scară largă nu numai în diagnosticarea bolilor, ci se găsește și în examinarea medico-legală. Este dificil să se prezinte o analiză în care se poate determina speciile de sânge care aparțin, parte a unui organ sau țesut a găsit pe arma crimei, care nu utilizează reacția de precipitare. În timpul acestui proces se utilizează seruri de precipitare, care se obțin prin imunizarea diferitelor animale și a păsărilor. Este important ca nivelul de titru seric nu a fost mai mic de 1: 10.000, și trebuie să aibă suficientă specificitate. De la fața locului detectat de sânge sau de crustele sale face o hota pentru fiz. O soluție care va fi ulterior afectată de serul de precipitare. Conform acestei reacții, este posibil să se stabilească tipurile de proteine ​​de țesut și de organe ale oamenilor și ale animalelor. Obținerea de extracte turbidite face necesară recurgerea la precipitații pe agar.

constatări

Analizând citi informația, se poate concluziona că reacția de precipitare sunt extrem de importante pentru o persoană, deoarece acestea permit de a diagnostica o varietate de antigeni prin anticorpi, deoarece acest fenomen este utilizat pe scară largă în domeniul științei criminalistice și permite identificarea tipului de sânge, țesut sau organ în legătură cu un anumit subiect. Există mai multe tipuri și metode de precipitare, care sunt utilizate în conformitate cu nevoile emergente ale problemei fiind rezolvate.