Reacții serologice: specii, utilizare

Diagnosticul de laborator al practic tuturor bolilor infecțioase se bazează pe detectarea anticorpilor din sângele pacientului, care sunt dezvoltați pentru antigeni ai agentului patogen, prin metode de reacții serologice. Au intrat în practica medicală de la sfârșitul secolului al XIX-lea - începutul secolului al XX-lea.

Dezvoltarea științei a contribuit la determinarea structurii antigenice a microbilor și a formulelor chimice ale toxinelor acestora. Acest lucru a permis crearea de seruri terapeutice, dar și de diagnostic. Acestea sunt obținute prin introducerea agenților patogeni slabi în animalele de laborator. După câteva zile de expunere din sângele iepurilor sau șoarecilor, preparatele utilizate pentru identificarea microbilor sau a toxinelor acestora sunt preparate utilizând reacții serologice.

Manifestarea externă a unei astfel de reacții depinde de condițiile de formulare a acesteia și de starea antigenelor din sângele pacientului. Dacă particulele de microbi sunt insolubile, atunci se precipită, se lizează, se leagă sau se imobilizează în ser. Dacă antigenii sunt solubili, apare fenomenul de neutralizare sau precipitare.

Reacția de aglutinare (PA)

Aglutinarea reacției serologice este foarte specifică. Este simplu de realizat și este suficient de clar pentru a determina rapid prezența antigenilor în serul pacientului. Se utilizează pentru a stabili reacția Vidal (diagnosticul de tifoid și paratifoid) și Veigl (Tifos).

Se bazează pe interacțiunea specifică dintre anticorpii umani (sau aglutininele) și celulele microbiene (aglutinogene). După interacțiunea lor, se formează particule care precipită. Acesta este un semn pozitiv. Pentru formularea reacției, agenți microbieni vii sau uciși, ciuperci, protozoare, celulele sanguine și celulele somatice.

Din punct de vedere chimic, reacția este împărțită în două etape:

1. Compus specific de anticorpi (AT) cu antigeni (AH).
2. Nespecifică - precipitarea conglomeratelor de AG-AT, adică formarea aglutinatului.

Reacția indirectă de aglutinare (RPHA)

Această reacție este mai sensibilă decât cea anterioară. Este folosit pentru a diagnostica bolile cauzate de bacterii, paraziți intracelulari, protozoare. Este atât de specific încât poate detecta chiar și o concentrație foarte scăzută de anticorpi.

Pentru formularea ei folosind celule roșii din sânge de oaie purificată și celule roșii sanguine umane pretratate cu anticorpi sau antigene (depinde ce laborator vrea să găsească). În unele cazuri, eritrocitele umane sunt tratate cu imunoglobuline. Se consideră că reacțiile serologice ale eritrocitelor au avut loc dacă s-au depus pe fundul tubului. O reacție pozitivă poate fi spus atunci când celulele sunt aranjate sub formă de umbrelă inversată, ocupând întregul fund. O reacție negativă este luată în considerare dacă celulele roșii din sânge s-au stabilit într-o coloană sau sub forma unui buton în centrul fundului.

Reacția de precipitare (RP)

Reacțiile serologice de acest tip servesc pentru a detecta particule extrem de mici de antigeni. Acestea pot fi, de exemplu, proteine ​​(sau părți ale acestora), compuși proteici cu lipide sau carbohidrați, părți ale bacteriilor, toxinele acestora.

Serurile pentru reacție sunt obținute prin infectarea artificială a animalelor, de obicei iepurii. Această metodă poate primi absolut orice ser de precipitare. Stadializarea reacțiilor de precipitare serologică este similară mecanismului de acțiune asupra reacției de aglutinare. Anticorpii conținuți în ser se combină cu antigeni în soluție coloidală, formând molecule de proteine ​​mari care sunt depozitate pe fundul tubului sau pe un substrat (gel). Această metodă este considerată foarte specifică și poate detecta chiar cantități neglijabile ale unei substanțe.

Folosit pentru a diagnostica ciuma, tularemia, antrax, meningita si alte boli. În plus, el este implicat în examinarea medico-legală.

Reacția de precipitare a gelului

Reacțiile serologice pot fi efectuate nu numai într-un mediu lichid, ci și într-un gel de agar. Aceasta se numește precipitare difuză. Cu ajutorul său, se studiază compoziția amestecurilor complexe antigenice. Această metodă se bazează pe chemotaxia antigenilor la anticorpi și invers. În gel se deplasează reciproc la viteze diferite și, întâlnindu-se, formează linii de precipitații. Fiecare linie este un set de AG-AT.

Reacția de neutralizare a exotoxinei cu antitoxină (PH)

Serurile antitoxice pot neutraliza efectul exotoxinei, care produce microorganisme. Aceasta este baza acestor reacții serologice. Microbiologia folosește această metodă pentru titrarea serurilor, toxinelor și toxoidelor, precum și pentru determinarea activității lor terapeutice. Neutralizarea toxinei este determinată de unitățile convenționale - AE.

În plus, datorită acestei reacții, este posibil să se determine tipul sau tipul de exotoxină care aparține. Acest lucru este folosit în diagnosticul de tetanos, difterie, botulism. Studiul poate fi efectuat atât pe "pe sticlă", cât și pe gel.

Reacția de lizare (RL)

Serul imun, care intră în corpul pacientului, are, pe lângă funcția sa principală imunitate pasivă, de asemenea, proprietăți de liză. Este capabil să dizolve agenți microbieni, elemente străine celulare și viruși care intră în corpul pacientului. În funcție de specificitatea serului care conține anticorpi, sunt izolate bacteriolizinele, citolizinele, spirohetolizele, hemolizinele și altele.

Acești anticorpi specifici se numesc "complement". Este conținut în aproape toate fluidele corpului, are o structură complexă a proteinelor și este extrem de sensibil la febră, agitare, aciditate și lumină directă a soarelui. Dar, în stare uscată, este capabil să își păstreze proprietățile de lizaj timp de până la șase luni.

Există tipuri de reacții serologice de acest tip:

- bacteriolysis;

- hemoliză.

Bacterioliza este efectuată utilizând serul de sânge al pacientului și un ser imun imun specific cu microbi vii. Dacă există o cantitate suficientă de complement în sânge, cercetătorul va vedea liza bacteriană și reacția va fi considerată pozitivă.

Al doilea răspuns serologic de sânge este că suspensia de eritrocite tratate hemolizine pacient conținând ser, care sunt activate numai în prezența unui anumit compliment. Dacă există unul, asistentul de laborator observă dizolvarea celulelor roșii din sânge. Această reacție este utilizată pe scară largă în medicina modernă pentru a determina titrul de complement (adică, valoarea sa cea mai mică provocând liza celulelor roșii din sânge) în serul sanguin și pentru producerea de analiză de legare a complementului. Acesta este modul în care se efectuează răspunsul serologic la sifilis - Reacția lui Wasserman.

Reacția de fixare a complementului (RCC)

Această reacție este utilizată pentru a detecta în serul de sânge al unui pacient un anticorp la un agent infecțios și, de asemenea, pentru a identifica agentul patogen din structura sa antigenică.

Până în prezent, am descris reacții serologice simple. RSK este considerată o reacție complexă, deoarece interacționează nu cu două, ci cu trei elemente: anticorp, antigen și complement. Esența sa constă în faptul că interacțiunea dintre anticorp și antigen apare numai în prezența proteinelor complementului care sunt adsorbite pe suprafața complexului AG-AT format.

Antigenii înșiși, după adăugarea complementului, suferă modificări semnificative, ceea ce indică calitatea reacției. Poate fi liză, hemoliză, imobilizare, acțiune bactericidă sau bacteriostatică.

Reacția în sine are loc în două faze:

1. Formarea unui complex antigen-anticorp, care este vizual invizibil pentru cercetător.
2. Modificarea antigenului sub acțiunea complementului. Această fază poate fi deseori urmărită cu ochiul liber. Dacă răspunsul vizual nu este vizibil, utilizați un sistem indicator suplimentar care vă permite să detectați modificările.

Sistemul de indicatori

Această reacție se bazează pe legarea complementului. La o oră după formularea DSC, eritrocitele purificate de ovine și serul hemolitic, care nu conțin complemente, se adaugă în eprubeta. Dacă complementul neconjugat rămâne în eprubeta, acesta se va alătura complexului AG-AT format între celulele de ouă din sânge și hemolizină și va determina dizolvarea lor. Aceasta va însemna că CCR este negativă. Dacă celulele roșii din sânge au rămas intacte, atunci, respectiv, reacția este pozitivă.

Reacția de hemaglutinare (RGA)

Există două reacții de hemaglutinare fundamental diferite. Una dintre ele este serologică, este utilizată pentru a determina grupurile de sânge. În acest caz, eritrocitele interacționează cu anticorpii.

Și a doua reacție nu se referă la serologică, deoarece celulele roșii din sânge reacționează cu hemaglutininele produse de virusuri. Deoarece fiecare agent acționează numai pe eritrocite specifice (pui, miel, maimuță), atunci această reacție poate fi considerată limitate specifică.

Înțelegeți, reacție pozitivă sau negativă, este posibilă prin localizarea celulelor sanguine de pe fundul eprubetei. Dacă imaginea lor seamănă cu o umbrelă inversată, atunci virusul dorit este prezent în sângele pacientului. Și dacă toate celulele roșii s-au format ca o coloană de monede, atunci nu există agenți patogeni necunoscuți.

Reacția de inhibare a hemaglutinării (RTGA)

Aceasta este o reacție foarte specifică care vă permite să determinați tipul, tipul de virus sau prezența anticorpilor specifici în serul pacientului.

Esența ei constă în faptul că anticorpii adăugat la tubul care conține materialul de testat, previne depunerea de antigeni pe eritrocite, oprind astfel hemaglutinare. Aceasta este o indicație calitativă a prezenței în sânge a antigenelor specifice unui anumit virus dorit.

Reacția imunofluorescenței (RIF)

Reacția se bazează pe capacitatea de a detecta complexe AG-AT fluorescent microscopie după tratamentul lor cu coloranți fluorochromici. Această metodă este ușor de manevrat, nu necesită alocarea culturii pure și nu durează prea mult. Este indispensabil pentru diagnosticarea rapidă a bolilor infecțioase.

În practică, aceste reacții serologice sunt împărțite în două tipuri: directe și indirecte.

RIF direct este produs cu un antigen, care este pre-tratat cu ser fluorescent. Și indirectă este că medicamentul este tratat mai întâi cu reaplicat zer fluorescent, care este specific pentru proteinele complexului K-AT și celulele microbiene devin vizibile prin microscopie diagnosticum convențional cuprinzând anticorpi la antigenul dorit și apoi.