Proprietățile tinctului sunt ce?

Înainte de a studia microorganismele sub microscop, proba studiată este supusă unei pregătiri speciale. Într-o formă naturală, aproape toate bacteriile sunt transparente, deci sunt colorate cu coloranți. Colorarea ne permite să determinăm atât proprietățile morfologice ale microbilor investigați, cât și apartenența lor la una sau la altă specie. Abilitatea microorganismelor de a percepe coloranții se numește proprietăți tinctoriale. Cu ajutorul lor, biologii determină tipul de microb, parametrii, trăsăturile structurilor și, de asemenea, identifică agenții patogeni ai bolilor infecțioase. Din acest articol veți învăța mai în detaliu că acestea sunt proprietăți tinctoriale și, de asemenea, modul în care acestea sunt utilizate în știință.

Sarcinile pe care metoda de colorare le rezolva

Mai întâi de toate, să aflăm ce semnificație are proprietățile tinctoriale ale microorganismelor. Colorarea eșantionului este una din tehnicile cheie ale microbiologiei, permițând studierea atât a structurii externe cât și a celei interne a organismelor. Bacteriile sunt microorganisme translucide care refracționează razele luminoase. Prin urmare, în microscopie obișnuită, ele nu pot fi luate în considerare. Diferite părți ale bacteriilor interacționează diferit cu colorantul. Proprietățile tinctului reprezintă o oportunitate excelentă pentru cercetători. Fiind diferiți în diferite microorganisme, ele ne permit să determinăm cele mai importante caracteristici: forma, dimensiunea, structura, locația și așa mai departe.

Pregătirea eșantionului și colorarea acestuia

Indiferent de ce tehnică de vopsire practică cercetătorul, această procedură constă într-o serie de pași obligatorii:

1. Pregătirea probei. În picătură de apă plasată pe culise, materialul studiat este introdus prin intermediul unei bucle bacteriologice.
2. Uscarea frotiului. Se efectuează la temperatura camerei sau într-un curent de aer cald (dar nu prea aproape de sursa de căldură).
3. Fixation. Asigură fixarea microorganismelor pe sticlă, pentru a spori susceptibilitatea lor la colorare.
4. Colorat. Colorantul se aplică pe proba de probă și se lasă să stea pentru o perioadă. Apoi, reziduurile colorantului sunt îndepărtate și proba este spălată cu apă.
5. Uscarea. Etapa finală, care vă permite să scăpați de resturile de apă după clătire. După uscare, proba este gata să fie examinată sub microscop.

Coloranți obișnuiți

Colorarea probelor se realizează cu ajutorul coloranților de anilină, cu un indice de aciditate diferit (pH). Ele sunt împărțite în: bază (accentul la a doua literă o), acid și neutru.

În vopselele de bază agentul de acțiune este un cation. Cu ajutorul diferiților reactivi este posibil să se obțină diferite culori de colorare a microbilor:

1. Roșu - pironină, safranină, neutră și purpuriu de bază.
2. Violet - thionină, metil, gențiană și violet de cristal.
3. Albastrul este albastru de metilen și Victoria.
4. Verde - malachit și verde de metilen.
5. Negrul este indulina.
6. Brown este un vesuvin și crisoid.

În coloranți acide un anion este atașat la proprietățile de colorare. Dintre acestea, cele mai frecvente sunt:

1. Fuchsin roșiatic și eozină.
2. Negrul este nigrozină.
3. Galbenul este acid picronic.

Coloranții neutri pot pata ambii anioni și cationi. Ca un exemplu frapant al acestora se poate numi rodamina V.

Metodele existente de colorare, bazate pe proprietățile tinctoare ale microorganismelor, pot fi împărțite în trei tipuri principale: colorarea vitală, posturală și de spori. Vom analiza mai detaliat fiecare dintre aceste metode.

Calea vitală

Această metodă este, de asemenea, numită intravital, prin urmare, colorarea este efectuată pentru a microscopa organismele vii. Introducerea medicamentului colorant permite studierea caracteristicilor structurilor și țesuturilor intracelulare. Există, de asemenea, metode de colorare vitală, sugerând uciderea probei imediat după colorare.

Pentru colorarea intravitală se folosesc coloranți specifici caracterizați prin toxicitate scăzută și putere mare de penetrare. În plus față de preparatele vitale, fluorochromii sau coloranții fluorescenți sunt de asemenea utilizați pentru a rezolva această problemă.

Cale posturală

Spre deosebire de versiunea anterioară, aici se efectuează colorarea după uciderea microorganismelor. Metodele de post-colorare sunt împărțite în simple și complexe. Simplul poate determina proprietățile morfologice ale organismelor studiate: forma, dimensiunea, locația, locația. Metodele complexe sunt concentrate strict și permit obținerea de informații despre structura microorganismului. Cel mai adesea, metodele complexe de colorare poartă numele creatorilor lor. Dintre acestea, următoarele metode sunt cele mai populare.

Metoda lui Gram. Metoda, dezvoltată la sfârșitul secolului al XIX-lea, se bazează pe diferențierea microbilor de permeabilitatea pereților celulari. Cu ajutorul coloranților de anilină (violet sau metil de gențiană) și spălarea ulterioară, cercetătorul primește două tipuri de germeni: Gram-pozitiv (culoare albastră caracteristică) și Gram-negativ (securizat). Pentru a obține o imagine mai completă, se utilizează și un colorant roșu, după tratare, chiar și microorganismele gram-negative obținând culoare - de la roz la roșu.

Metoda lui Gram permite clasificați microbii și să efectueze separarea lor în funcție de proprietățile tincturii. Aceasta este una dintre cele mai simple și mai frecvente metode de preparare a unei mostre pentru microscopie. Valoarea aplicată a acestei tehnici este de a diagnostica diferite boli infecțioase.

Metoda Tsile-Nielsen. Această metodă a fost dezvoltată și la sfârșitul secolului al XIX-lea. Se bazează pe determinarea rezistenței la acid a bacteriilor prin colorare. Prin această metodă, datorită proprietăților tinctoare ale microorganismelor, este posibilă identificarea agenților patogeni de tuberculoză, lepra și micobacterii.

Metoda Romanovsky-Giemsa. Această metodă a fost dezvoltată încă de la începutul secolului al XX-lea. Esența sa constă în faptul că după colorarea eșantionului cu un colorant special, bacteriile acidofile dobândesc diferite nuante de roșu și bacterii bazofile - de la purpuriu la albastru.

Acidofii sună lapte și bacterii de acid acetic, pentru viața căreia este necesară o aciditate scăzută a mediului. Bazofilele sunt microbi care pot fi colorați cu coloranți de bază. Astfel, metoda se bazează pe separarea microbilor de valoarea acidității mediului. Este larg utilizat în studiul morfologiei protozoarelor și spirochetelor.

Metoda Burry-Hins. Permite determinarea prezenței bacteriilor în capsule.

Metoda lui Morozov. Această metodă de colorare face posibilă detectarea flagelului de bacterii. Pentru aceasta este necesară efectuarea unor astfel de manipulări:

1. Eșantionați proba cu acid pentru a lăsa flagelul să se desprindă.
2. Fixați cârpa slăbită cu tanin.
3. Se colorează eșantionul cu azotat de argint.

Ca rezultat, bacteria, cu toate semnele ei, devine vizibilă. Culoarea sa poate varia de la galben la maro.

Colorarea prin spori

Proprietățile tincturii ale microorganismelor fac posibil, cu ajutorul colorării, să-și facă sporii vizibile. Pentru aceasta, tehnica Tsilya-Nilson este cea mai des utilizată. Esența sa constă în prelucrarea probei de testare cu fuchsin Tsil și decolorarea ulterioară cu ajutorul acidului sulfuric 1%. Ca urmare, sporii sunt colorați roz și se remarcă bine pe fundalul bacteriilor albastre.

Pentru a obține o imagine vizibilă a litigiului, tehnica lui Orzeszko permite și ea. Conform acestei metode, învelișurile de spori sunt gravate mai întâi la o temperatură ridicată cu acid și apoi se folosește colorarea Ziehl-Nilson.

Caracteristici structurale ale microbilor

Celula microorganismului constă, de obicei, din pereții (membrana), membrana citoplasmatică, citoplasma, conținând nucleotide și incluziuni în compoziția sa. Unele specii de microbi posedă de asemenea flageluri, pili sau cilia și pot forma capsule sau spori.

Carcasa microorganismului determină forma sa și, de asemenea, o protejează de condițiile adverse de mediu și de presiunea internă osmotică. Pereții microbilor au o compoziție și o structură chimică destul de complexă. În celulele Gram-pozitive și Gram-negative ele diferă. Primii au un perete de celule groase care conține acizi teicoici și câteva lipide. Peretele celui de-al doilea constă din straturile lor de polipeptidă și polizaharidă.

În exterior, peretele celular este acoperit cu un strat mucus. La unii microbi, poate crește (umfla) formând o capsulă, constând în principal din polizaharide și, uneori, din polipeptide. Nu răspunde la colorare. Acesta este motivul pentru care microbii sunt studiați folosind metoda Burri-Hins. La unii agenți patogeni (de exemplu, pneumococ), capsula se formează numai în organisme de animale sau de oameni.

În studiu de microbi sub microscop se atrage atenția asupra colorării citoplasmei și a structurilor acesteia. Citoplasma poate fi colorată omogen (omogen) sau eterogen (sunt incluse incluziuni de natură organică sau anorganică). Pentru a studia incluziunile, folosiți metode speciale de colorare (de exemplu, în conformitate cu Neisser). În plus, prezența unui nucleu sau a unei nucleotide este determinată în citoplasmă.

După ce am aflat că acestea sunt proprietăți tinctoriale și cum ajută la microscopie, vom lua în considerare caracteristicile unor microbi obișnuiți.

streptococi

Din punct de vedere al proprietăților tinctului, streptococi sunt microorganisme gram-pozitive, deci ele sunt determinate prin metoda Gram. Cea mai strălucitoare culoare a acestor bacterii apare atunci când este expusă la Laffer albastru. Structura celulelor lor seamănă cu un lanț.

Salmonella

Acestea sunt anaerobe facultative, majoritatea fiind mobile datorită prezenței flagelului. Pe un mediu nutritiv dens, salmonella se adună în colonii rotunde de culoare alb-gri. Disputele nu se formează, au peritrichi și microcapsule. Ca streptococi, salmonella sunt colorate prin metoda Gram. Diferența constă în faptul că proprietățile tinctului salmonelei sunt gram-negative.

meningococ

Ei au o formă polimorfă rotunjită. Pe mediul nutritiv sunt situate în perechi. Proprietățile tinctoriale ale meningococilor sunt de așa natură încât sunt gram-negative, dar nu răspund clar la colorarea Gram. Colorarea inegală se datorează faptului că cu cât este mai veche celula, cu atât sunt mai slabe proprietățile sale tinctinale. Flagelul nu are meningococi, dar nu formează un spori.

Cholera Vibrio

Acest microb are un flagel polar, care este echipat cu o teacă și o membrană ondulatoare. Cholera vibrio are o mobilitate pronunțată. Se caracterizează prin polimorfism. Proprietățile tincturii ale holerei vibrio determină colorarea cu coloranți anilinici. Ca o regulă, este apa fuchsin Pfeifer sau carbolic fuchsin Shlya.

E. coli

Este un anaerob facultativ care nu formează spori. Celulele sunt sub formă de tije cu capete rotunjite. Proprietățile tinctoriale ale Escherichia coli îl poartă bacterii gram-negative. Tulpinile de bacterii cu flagel peritricial localizate se pot mișca.

neutrofilelor

Acest nume a fost dat microbilor datorită proprietăților lor tinctului. Neutrofilele pot fi colorate intens în conformitate cu metoda Romanovsky, atât coloranți de bază, cât și eozină acidă. Bacteriile adulte au un nucleu segmentat, ceea ce înseamnă că aparțin celulelor polimorfonucleare. Ele sunt înzestrate cu aderență, mobilitate și, de asemenea, capacitatea de chemotaxie și de captare a particulelor. Împreună cu bazofilele și eozinofilele aparțin granulocitelor.

bazofile

Prin analogie cu microbii anteriori, aceste bacterii și-au luat numele din cauza proprietăților tinctului. Bazofilele sunt puternic colorate cu colorantul principal și nu sunt complet colorate cu eozină acidă. Ei au granulocite mari și conțin foarte multe: histamină, serotonină, prostaglandine, leucotriene și alți mediatori ai proceselor inflamatorii și alergice.

eozinofile

Spre deosebire de cele două granulocitelor anterioare, acești microbi sunt colorant intens acide colorează doar și nu pătează principalele droguri. Eozinofilele sunt înzestrate cu capacitatea de extravasare, chemotaxie și mișcare amoeboidă. Ei pot absorbi și leagă un număr de mediatori de reacții inflamatorii și alergice.