Analiza PCR: ce este? Cum să luați corect testul PCR

Nu cu mult timp în urmă, a fost dezvoltată o metodă sigură, extrem de sensibilă și rapidă pentru diagnosticarea diferitelor boli infecțioase umane. Această metodă se numește "analiză PCR". Ce este asta, în ce

Istoria descoperirii

A inventat metoda de reacție în lanț a polimerazei (PCR), om de știință american Cary Mullis în 1983. Initial brevetat metodă de diagnosticare compania "Cetus Corporation", în care a lucrat creatorul său. Dar, în 1992, toate drepturile și brevetele au fost vândute companiei "Hoffman-La Roche". Apoi, se pare că au fost efectuate studii paralele similare și au fost înregistrate de alți biologi americani, cum ar fi Alice Chen, David Edgar și John Treel. În 1980, oamenii de știință sovietici A. Slyusarenko, A. Kaledin și S. Gorodetsky. Prin urmare, era imposibil să se determine singurul deținător de drepturi. Mulți biochimisti remarcabili au contribuit la dezvoltarea metodei de reacție în lanț a polimerazei și au brevetat inovațiile. În prezent, analiza PCR este efectuată peste tot în laboratoare special echipate.

Esența metodei de diagnosticare PCR

Analiza PCR: ce este și cum funcționează? Esența metodei este de a crește într-un mediu microbian specific prin intermediul unei enzime speciale de ADN polimerază în condiții artificiale. Pentru a face acest lucru, multiplicați materialul ADN existent. Astfel, prezența unui agent patogen într-un eșantion, suma va fi majorat în detrimentul manipulare de laborator biochimice și bacteriile nu va fi dificil de detectat la microscop.

Cum se desfășoară cercetarea materială?

Analiza necesită:

• Șablonul DNA;
• primeri care leagă capetele unui fragment de material;
• o enzimă ADN polimerază stabilă termic;
• substanțe chimice care asigură buna funcționare a enzimelor;
• o soluție tampon necesară pentru a crea condiții adecvate pentru creșterea și dezvoltarea materialului ADN.

  

Pentru a efectua PCR, se efectuează 25-30 repetări, constând din trei etape: denaturarea, recoacerea și alungirea.

Pentru a analiza reacția în lanț a polimerazei, se utilizează un dispozitiv special - un amplificator. Echipamentul modern vă permite să setați programul necesar pentru încălzirea și răcirea tuburilor pentru a elimina erorile în timpul diagnosticării.

Unde se utilizează diagnosticul?

Metoda de reacție în lanț a polimerazei este utilizată în diferite domenii ale medicinei:

• Oamenii de știință de la forensic o utilizează pentru a identifica materialul genetic, cum ar fi părul, saliva sau sângele;
• Analiza sângelui PCR ajută la genotiparea, de exemplu, pentru a detecta o reacție individuală modificată genetic la un medicament specific;
• cu ajutorul unei astfel de metode, să stabilească existența legăturilor familiale între oameni;
• metoda cea mai populară PCR a devenit în diagnosticarea medicală pentru definirea diferitelor boli infecțioase.

Ce infecții dezvăluie PCR?

Deci, medicina a folosit mult timp și cu succes analiza PCR. Ce este, am învățat deja. Și ce agenți patogeni pot fi detectați? Metoda PCR diagnozează următoarele boli infecțioase:

• hepatită A, B, C;
• ureaplasmosis;
• candidoza;
• chlamydia;
• micoplasmoze;
• Vaginoza bacteriană;
• infecție cu mononucleoză;
• trichomoniaza;
• infecție cu papilomavirus;
• tuberculoza;
• infecția cu herpes de tip 1 și 2;
• Helicobacter pylori;
• citomegalovirus;
• difterică;
• salmoneloza;
• Infecția cu HIV.

  

De asemenea, metodele PCR sunt utilizate în diagnosticul cancerului.

Avantajele metodei

Diagnosticul PCR are mai multe avantaje:

1. Sensibilitate ridicată. Chiar și numai cu câteva molecule de ADN ale microorganismului, analiza PCR determină prezența infecției. Metoda va ajuta la bolile cronice și latente. Adesea, în astfel de cazuri, microorganismul este necultivat în alte moduri.
2. Pentru studiu, este adecvat orice material, cum ar fi saliva, sânge, sex, păr, celule epiteliale. Cel mai frecvent este un test de sânge și un frotiu urogenital pe PCR.

   

3. Nu necesită cultivarea culturilor pe termen lung. Procesul de diagnosticare automată vă permite să obțineți rezultatele studiului după 4-5 ore.
4. Metoda este aproape 100% fiabilă. Au fost înregistrate doar cazuri singulare cu un rezultat fals negativ.
5. Capacitatea de a identifica mai multe tipuri de agenți patogeni dintr-o singură probă de material. Acest lucru nu numai că accelerează procesul de diagnosticare a bolii, dar, de asemenea, reduce semnificativ costurile materiale. Adesea, medicul prescrie o analiză PCR completă. Prețul examenului, care constă în definirea a șase agenți patogeni, este de aproximativ 1500 de ruble.

Recomandări pentru pregătirea analizei

Pentru ca rezultatele să fie fiabile în studiul PCR, analiza trebuie făcută pe baza recomandărilor pentru pregătirea preliminară pentru diagnosticare:

1. Înainte de a renunța la saliva, trebuie să vă abțineți de la a lua alimente și medicamente cu 4 ore înainte de a lua materialul. Imediat înainte de procedură, clătiți-vă gura cu apă fiartă.
2. Normele de mai sus trebuie urmate atunci când se ia o mostră de pe suprafața interioară a obrazului. După clătire, se recomandă efectuarea unui masaj ușor al pielii pentru izolarea secreției glandei.
3. Urina este de obicei recoltată la domiciliu. Pentru a face acest lucru, trebuie să faceți o toaletă completă a organelor genitale. Este necesar să se colecteze 50-60 ml de urină într-un recipient steril de plastic. Pentru a asigura puritatea materialului, se recomandă ca femeile să introducă un tampon în vagin, iar bărbații să tragă maxim pliul de piele. Nu puteți lua materialul în timpul fluxului menstrual.
4. Pentru livrarea spermei, trebuie să vă abțineți de la actul sexual timp de 3 zile înainte de a lua materialul. De asemenea, medicii sfătuiesc să refuze să viziteze sauna și să ia o baie fierbinte, consumând alcool și mâncare picantă. Cu 3 ore înainte de test, trebuie să vă abțineți de la urinare.
5. Pentru a trece frotiu urogenital, de exemplu, în cazul în care analiza pe o Chlamydia PCR, atât pentru femei cât și bărbați, se recomandă ca odihna sexuală timp de 3 zile. Cu 2 săptămâni înainte de test, medicamentele antibacteriene nu ar trebui luate. Pentru o săptămână trebuie să întrerupeți utilizarea de geluri intime, unguente, supozitoare vaginale, seringi. Cu 3 ore înainte de test, trebuie să vă abțineți de la urinare. În timpul menstruației, colectarea de material nu se efectuează, numai după 3 zile după încetarea eliminării sângelui poate lua un frotiu urogenital.

PCR în timpul sarcinii

În perioada în care se așteaptă copilul, multe boli infecțioase, transmise sexual, sunt extrem de periculoase pentru dezvoltarea normală a fătului. DTS pot provoca retardare a creșterii intrauterine, avort spontan sau naștere prematură, malformații congenitale ale copilului. Prin urmare, este extrem de important să treceți un test PCR rapid. Este necesară prezentarea analizei la înregistrare - până la 12 săptămâni.

Materialul este luat din canalul cervical cu o perie specială. Procedura este nedureroasă și nu reprezintă un pericol pentru copil. De obicei, în timpul sarcinii, chlamydia este analizată prin metoda PCR, precum și ureaplasmoză, micoplasmoză, citomegalovirus, herpes și papilomavirus. Un astfel de complex de examinări se numește PCR-6.

PCR pentru diagnosticul HIV

Datorită faptului că metoda de reacție în lanț a polimerazei este foarte sensibilă la schimbările în organism și la condițiile diagnosticului, mulți factori pot afecta rezultatul. Prin urmare, analiza PCR pentru infecția cu HIV nu este o metodă sigură, eficacitatea acesteia fiind de 96-98%. În restul de 2-4% din cazuri, testul dă rezultate fals pozitive.

Dar, în unele situații, HIV nu poate fi evitat fără diagnosticarea PCR. De obicei, aceasta se administrează persoanelor cu un rezultat ELISA fals negativ. Astfel de indicatori indică faptul că persoana nu a dezvoltat încă anticorpi împotriva virusului și nu poate fi detectată fără o creștere multiplă a numărului. Acest lucru poate fi realizat prin efectuarea unui test de sânge utilizând o metodă PCR.

De asemenea, acest diagnostic este necesar pentru copiii din primul an de viață care sunt născuți dintr-o mamă HIV-pozitivă. Metoda este singura modalitate de determinare fiabilă a statutului copilului.

PCR pentru diagnosticul de hepatită

Metoda de reacție în lanț a polimerazei permite detectarea ADN-ului virusului hepatitei A, B, C, cu mult înainte de formarea de anticorpi la infecție sau simptom debut. Deosebit de eficientă este analiza PCR privind hepatita C, deoarece 85% din astfel de boli sunt asimptomatice și fără tratament în timp util devine cronica.

Detectarea în timp util a agentului patogen va contribui la evitarea complicațiilor și a tratamentului prelungit.

Studiu complet PCR

Analiza complexă a PCR: ce este? Asta este Metoda de reacție în lanț de examinare polimezarnoy care cuprinde determinarea simultană a mai multor tipuri de infecții: genitalium Mycoplasma, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candidoza, Trichomonas, citomegalovirus, ureaplasma urealichyum, herpes de tip 1 și 2, gonoree, papilomavirus. Prețul acestor diagnostice variază de la 2000 la 3500 de ruble. în funcție de clinică, de materialele și echipamentul utilizat, precum și de tipul de analiză: calitativ sau cantitativ. Ceea ce este necesar în cazul dumneavoastră - medicul va decide. În unele cazuri, este suficient doar să se determine prezența agentului patogen, în altele, de exemplu, cu infecția cu HIV, un rol important îl are un titru cantitativ. La diagnosticarea tuturor agenților patogeni de mai sus, testul se numește "analiză PCR-12".

Explicarea rezultatelor analizei

Decodificarea analizei PCR nu este dificilă. Există doar 2 scale ale indicatorului - "rezultat pozitiv" și "rezultat negativ". Dacă se detectează un agent patogen, medicii pot confirma prezența bolii cu încredere de 99% și pot continua tratamentul pacientului. În metoda cantitativă de determinare a infecției în coloana corespunzătoare, va fi indicată valoarea numerică a bacteriilor detectate. Numai un medic poate determina gradul de boală și poate prescrie tratamentul necesar.

În unele cazuri, de exemplu, în cazul determinării infecției HIV prin PCR, dacă rezultatul este negativ, este necesar să se efectueze teste suplimentare pentru confirmarea rezultatelor.

Unde se face analiza?

Unde pot lua analiza PCR: în policlinica de stat sau într-un laborator privat? Din păcate, în instituțiile medicale municipale, echipamentele și metodele sunt adesea depășite. Prin urmare, este mai bine să dați prioritate laboratoarelor private cu echipamente moderne și personal cu înaltă calificare. În plus, într-o clinică privată veți obține rezultate mult mai rapide.

În Moscova, multe laboratoare particulare oferă analize PCR pentru diferite infecții. De exemplu, în clinici precum Vita, Complex Clinic, Happy Family și Uro-Pro, se efectuează analiza PCR. Prețul examenului este de 200 de ruble. pentru definirea unui agent patogen.

Se poate concluziona că diagnosticul de boli infecțioase prin metoda PCR este, în majoritatea cazurilor, o metodă rapidă și sigură de detectare a agentului patogen în organism în primele etape ale infecției. Dar, în anumite cazuri, merită ales alte metode de diagnosticare. Necesitatea de a efectua un astfel de studiu poate fi determinată numai de un specialist. Decodificarea analizei PCR necesită, de asemenea, o abordare profesională. Urmați recomandările medicului și nu vă predați teste, care nu sunt necesare.